Urée-tryptophane

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Le milieu Urée-tryptophane, improprement appelé urée-indole est un milieu de culture synthétique utilisé en bactériologie permettant la mise en évidence simultanée :

De la production d'indole (par l'hydrolyse du tryptophane par la tryptophanase) ;
De l'hydrolyse de l'urée (par une uréase) ;
La désamination du tryptophane par la tryptophane désaminase.

[] Composition

- L-tryptophane ...............................  3 g
- Urée ........................................ 20 g
- Monophydrogénophosphate de potassium ........  1 g
- Dihydrogénophosphate de potassium ...........  1 g
- Chlorure de sodium ..........................  5 g
- Éthanol à 95 °GL ............................ 10 mL
- Rouge de phénol ............................. 25 mg
- Eau distillée (qsp) .........................  1 L

[] Préparation

resultats possibles

à stériliser par filtration.(utiliser de l'eau stérile pour limiter la contamination initiale)

[] Lecture

A uréase -
B uréase +
C indole +
D indole -
E TDA +
milieu rouge (basique) : uréase +
milieu orange ou jaune : uréase -
après addition de réactif de Kovacs : anneau rouge (indole +), anneau jaune (indole -)
après addition de chlorure de fer III : marron (TDA +), jaune (TDA -)

[] Production d'indole

La réaction d'hydrolyse du tryptophane, catalysée par la tryptophanase, produit de l'indole, de l'acide pyruvique et de l'ammoniac selon l'équation suivante :

L'indole produit est mis en évidence par le réactif de Kovacs. Le diméthylamino-4-benzaldéhyde réagit avec l'indole avec formation d'un composé rouge.

[] Hydrolyse de l'urée

Elle est catalysée par l'uréase, il y a production de dioxyde de carbone et d'ammoniac. Ce dernier alcalinise le milieu. Cette alcalinisation du milieu est mise en évidence par le virage du rouge de phénol au rose.

$H_{2}N - CO - NH_{2} + H_{2}O \longrightarrow \vec{CO_{2}} + \vec{NH_{3}}$

[] Désaminsation du tryptophane

Consulter l'article à propos de la tryptophane désaminase.

L'acide indole-pyruvique est mis en évidence par sa complexation en un composé marron foncé en présence d'ions fer III (ferriques, $F e 3 +$ ).

Catégories : Milieu de culture • Bactériologie